前言
子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma)又稱子宮體癌，原發(fā)于子宮內(nèi)膜上皮，是女性生殖道三大惡性腫瘤之一，約占女性癌癥總數(shù)的7％，占女性生殖道惡性腫瘤的20％~30％，其發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)。發(fā)病年齡漸趨年輕化，小于40歲患者的比例由過(guò)去的1％～8％上升至13.3％。子宮內(nèi)膜癌是女性圍絕經(jīng)期出血的重要原因，易誤診為月經(jīng)不調(diào)而延誤診斷，其病因迄今尚未明確，但主要與雌激素的長(zhǎng)期刺激有關(guān)。用于復(fù)制子宮內(nèi)膜癌的動(dòng)物主要是免疫缺陷小鼠，少數(shù)采用裸大鼠。
部分造模方法
使用動(dòng)物：裸鼠
【造模機(jī)制】：
1.將人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞注射于裸鼠皮下或者子宮腔，分別建立皮下瘤和原位瘤?？捎镁G色熒光蛋白標(biāo)記細(xì)胞，活體觀察腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。
2.將人原發(fā)子宮內(nèi)膜癌手術(shù)切除標(biāo)本移植到裸鼠皮下建立動(dòng)物模型。
【造模方法】：
1.小鼠
⑴選4~5周齡BALB/c-nu/nu裸鼠，雌性，體重10~12g。人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株(lshikawa細(xì)胞株，HEC-1A或者HEC-1B細(xì)胞株)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
⑵模型制備：消化收集人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞，分別以800r/min離心5~8分鐘，棄上清液，按接種濃度5×107/0.1ml稀釋細(xì)胞。消毒裸鼠左下肢近腹股溝皮膚處，接種后每天觀察注射點(diǎn)有無(wú)破潰紅腫，以皮下結(jié)節(jié)直徑超過(guò)0.5cm為成瘤標(biāo)準(zhǔn)，2周左右成瘤。至腫瘤長(zhǎng)至1cm3時(shí)取出瘤組織塊，于含10％胎牛血清的培養(yǎng)液。將組織塊切成1.5mm×1.5mm×3mm瘤塊，分別以小切口方式及無(wú)菌套管針進(jìn)行皮下接種，小切口絲線縫合1針。置于恒溫消毒的獨(dú)立通風(fēng)籠盒內(nèi)，觀察裸鼠成瘤情況，每3天以游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小1次，至接種后45天，并進(jìn)行病理檢查。
⑶模型檢測(cè)：①體內(nèi)成瘤生長(zhǎng)曲線的測(cè)定：測(cè)裸鼠體重和腫瘤體積，并用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)(L)、寬(W)、高(H)，腫瘤體積(V)按公式計(jì)算：V=π/6(L×W×H)，單位為厘米(cm)。部分腫瘤組織用10％甲醛固定，部分腫瘤組織儲(chǔ)存在液氮中備用。②移植瘤的病理學(xué)檢查：處死荷瘤裸鼠后，觀察移植瘤的形態(tài)，取新鮮腫瘤組織進(jìn)行組織學(xué)測(cè)定及常見(jiàn)癌基因的免疫組織化學(xué)的檢測(cè)。③移植瘤DNA倍體檢測(cè)：新鮮的腫瘤組織塊，直徑約5mm，在200目銅網(wǎng)上稍用力摩擦，將其制備成單細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞儀測(cè)定，以子宮癌細(xì)胞株的檢測(cè)結(jié)果作為對(duì)照。④癌基因的免疫組化檢測(cè)：子宮癌細(xì)胞株的檢測(cè)結(jié)果作為對(duì)照。
2.大鼠 選裸大鼠。凍存Ishikawa細(xì)胞復(fù)蘇后，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在裸大鼠后肢近腹側(cè)的疏松皮下做一皮丘，內(nèi)含0.5ml細(xì)胞懸液(1×106個(gè)）。2周后，將腫瘤修剪成2mm3瘤塊，放入盛有等滲生理鹽水的平皿中并置于冰上備用。裸大鼠麻醉后， 將其下腹正中做一長(zhǎng)約2cm切口，暴露雙側(cè)子宮，切開左側(cè)子宮中上1/3處子宮前壁全層，用顯微鑷將瘤塊植入宮腔。
【模型特點(diǎn)】：
荷瘤裸鼠晚期明顯消瘦，活動(dòng)力、反應(yīng)力均下降，出現(xiàn)惡病質(zhì)，直至衰竭死亡。由接種皮下瘤組織塊的第二代移植瘤生長(zhǎng)曲線可知，接種組織塊在短時(shí)期內(nèi)即可觀察到腫瘤的膨脹性生長(zhǎng)通過(guò)對(duì)比可觀察到腫瘤組織塊鼠間移植的第二代腫瘤比原代細(xì)胞液中的皮下腫瘤生長(zhǎng)速度快。裸大鼠皮下瘤生長(zhǎng)2周時(shí)行低齡裸大鼠宮腔原位移植，成瘤率可達(dá)70％。
【模型的評(píng)估和應(yīng)用】：
通過(guò)建立人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株小鼠皮下移植瘤模型，模擬人體子宮內(nèi)膜癌的生長(zhǎng)環(huán)境，符合人體子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)特點(diǎn)，可以作為探索人子宮內(nèi)膜癌中藥治療及生物治療和客觀評(píng)價(jià)治療手段效果的合適的動(dòng)物模型。裸大鼠宮腔原位移植后3~4周腫瘤生長(zhǎng)局限在子宮內(nèi)，肉眼既能探及腫瘤又不發(fā)生轉(zhuǎn)移，這恰好符合人類早期子宮內(nèi)膜癌的臨床特點(diǎn)。裸大鼠體型、器官血管等都較裸小鼠大，更適于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究的復(fù)雜操作，尤其是其盆腔血管較粗大，可用于人類腫瘤介入治療的實(shí)驗(yàn)研究。
參考文獻(xiàn)：
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