前言
年齡相關(guān)性黃斑變性(age related macular degeneralion, AMD)是65歲以上老年人致盲的主要原因。AMD分為無(wú)新生血管生成的干性以及新生血管生成的濕性表現(xiàn)。濕性AMD患者發(fā)生CNV是導(dǎo)致視力喪失的最常見(jiàn)因素。本章將介紹CNV的造模方法。
部分造模方法
使用動(dòng)物：小鼠
【造模機(jī)制】：
氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管，病理性的新生血管形成伴有從視網(wǎng)膜爬行到玻璃體異常的血管芽。這種新生血管芽導(dǎo)致很多并發(fā)癥，如血漿滲漏、出血，并在某些情況下，引起牽拉性視網(wǎng)膜脫離或致盲。在高氧暴露的第一個(gè)階段（出生后7~12天），視網(wǎng)膜血管收縮以調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜中的氧分壓，同時(shí)位于中心視網(wǎng)膜區(qū)的不成熟毛細(xì)血管退化導(dǎo)致中心區(qū)血管閉塞。由于高氧暴露和生理性的垂直血管芽從淺層毛細(xì)血管網(wǎng)向深層生長(zhǎng)的時(shí)相重疊，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜深層毛細(xì)血管網(wǎng)形成明顯的延遲。第二個(gè)階段，在出生后12天回到正?？諝猸h(huán)境中之后，血管閉塞區(qū)開始缺氧，小鼠的視網(wǎng)膜血管閉塞區(qū)無(wú)血管和病理性新生血管的生成。
【造模方法】：
將1周小鼠與它們的母鼠置于氧濃度為75％±2％的動(dòng)物氧艙中喂養(yǎng)5天。氧艙內(nèi)氧流量控制在0.5~0.6L/min，排氣流量大小可自行調(diào)節(jié)，保證氧氣循環(huán)流動(dòng)，而且濃度穩(wěn)定在75％左右，等到氧艙中氧氣濃度穩(wěn)定后，每隔4小時(shí)用數(shù)字測(cè)氧儀監(jiān)測(cè)氧艙內(nèi)氧氣濃度，保證氣體的流入和流出平衡。氧艙內(nèi)壓力一定要保持為常壓或者接近常壓。而后再在正?？諝鈼l件下喂養(yǎng)5天。
【模型特點(diǎn)】：
經(jīng)過(guò)5天的氧誘導(dǎo)，并在正?？諝鈼l件下飼養(yǎng)5天后，C57BL/6J小鼠出現(xiàn)了明顯的血管攣縮或者擴(kuò)張、迂曲、分布稀疏，部分血管出現(xiàn)栓塞，可見(jiàn)明顯的無(wú)灌注區(qū)，主要集中于視網(wǎng)膜的中央部，周邊部有新生血管或散在的出血存在（圖12-4)。出生后17天，氧誘導(dǎo)小鼠有大量的血管內(nèi)皮細(xì)胞突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜，有的甚至形成血管網(wǎng)到達(dá)玻璃體，而在出生后17天的正常小鼠的視網(wǎng)膜組織切片上，幾乎未觀察到突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核。氧誘導(dǎo)小鼠內(nèi)層視網(wǎng)膜的抗VEGF免疫組織化學(xué)染色增強(qiáng)。
圖12-4 氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管
【模型評(píng)估和應(yīng)用】：
氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管可模擬早產(chǎn)兒過(guò)早暴露于正常氧分壓環(huán)境，引起早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜疾病的病例，可為研究早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜疾病的診治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。造模過(guò)程中，為保證小鼠出艙后的存活率，可每天打開大氣體流入口和流出口充分換氣讓實(shí)驗(yàn)動(dòng)物代謝產(chǎn)生的有毒有害氣體充分排出，也為了使水蒸氣能夠排出，而后再重新調(diào)節(jié)氧流量，使其保持在實(shí)驗(yàn)濃度條件下即可。特別是夏季，要經(jīng)常通風(fēng)。實(shí)驗(yàn)期間若有母鼠死亡，則開艙用備用母鼠代替哺乳，可用替代母鼠的墊料充分覆蓋和涂抹仔鼠，防止食仔鼠或者不哺乳現(xiàn)象的發(fā)生。
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