前言
年齡相關(guān)性黃斑變性(age related macular degeneralion, AMD)是65歲以上老年人致盲的主要原因。AMD分為無新生血管生成的干性以及新生血管生成的濕性表現(xiàn)。濕性AMD患者發(fā)生CNV是導(dǎo)致視力喪失的最常見因素。本章將介紹CNV的造模方法。
部分造模方法
使用動(dòng)物：大鼠
【造模機(jī)制】：
目前認(rèn)為，強(qiáng)光或者持續(xù)光暴露導(dǎo)致的視網(wǎng)膜損傷受到種屬、區(qū)域、飲食、光飼養(yǎng)歷史的預(yù)處理和基因背景的影響。視網(wǎng)膜氧化光損傷的機(jī)制之一，視網(wǎng)膜氧化損傷和感受器細(xì)胞損傷反應(yīng)是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、酶活性的變化和激活、細(xì)胞內(nèi)金屬離子、多種凋亡途徑等綜合作用的結(jié)果，同時(shí)可能存在種屬依賴性。
【造模方法】：
在光照方式和強(qiáng)度選擇上，Esfandiari等證實(shí)明暗交替飼養(yǎng)更符合生物的日常生存狀態(tài)，并可降低大鼠視網(wǎng)膜損傷的閾值，造成的損傷更為嚴(yán)重。選擇8~9周的成年大鼠，選擇將大鼠置于明暗交替環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，建模前完全暗適12小時(shí)，用(5000±300) lux強(qiáng)度光照射3小時(shí)，可導(dǎo)致大鼠視網(wǎng)膜重度損傷。根據(jù)大鼠的活動(dòng)特性，造模時(shí)間選為晚19 : 00至次日早7: 00。
【模型特點(diǎn)】：
給予1~3小時(shí)光照強(qiáng)度(5000±300) lux的光輻照，均可以導(dǎo)致視網(wǎng)膜電生理功能的降低。不同時(shí)間光輻照后，ERG各測(cè)量指標(biāo)的變化與輻照時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)，輻照時(shí)間越長(zhǎng)，改變?cè)矫黠@，損傷越重，實(shí)驗(yàn)各組間比較均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織切片結(jié)構(gòu)層次清晰，光感受器的外節(jié)盤膜排列整齊、規(guī)則，內(nèi)核層和外核層排列緊密，染色均勻。強(qiáng)光輻照對(duì)視網(wǎng)膜有明顯的損傷作用，損傷部位主要位于大鼠顳上象限區(qū)域，光損傷是一個(gè)級(jí)別反應(yīng)，不同區(qū)域損傷程度差異很大。光輻照后不同時(shí)間點(diǎn)，視網(wǎng)膜ONL各區(qū)域厚度呈現(xiàn)明顯不同（圖12-5/文末彩圖12-5)。
圖12-5 不同光照時(shí)間下的視網(wǎng)膜損傷模型
注：A．不同光照時(shí)間下視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)對(duì)比(×400,Scale bar =50µm); B．不同光照時(shí)間下不同區(qū)域視網(wǎng)膜外網(wǎng)層厚度變化(REP：色素上皮層；OS：光感受器外節(jié)；IS：光感受器內(nèi)節(jié)；ONL：外核層；OPL：外叢狀層；INL：內(nèi)核層； IPL：內(nèi)叢狀層；GCL：神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層）
【模型評(píng)估和應(yīng)用】：
光損傷視網(wǎng)膜疾病動(dòng)物模型，因?yàn)楦鞣N造模設(shè)備的不同，產(chǎn)生的效果不盡相同。實(shí)驗(yàn)中要保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的視網(wǎng)膜能充分地被光照射；在光強(qiáng)的選擇上，要以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑榛A(chǔ)，選擇合適的光強(qiáng)；在造模動(dòng)物的年齡上，要注意選擇成年大鼠，Joly等報(bào)道給予幼年(2周或者4周）和成年(8周）大鼠同等的光照強(qiáng)度，幼鼠遭受的光照損傷較輕，但這種優(yōu)勢(shì)在4周后逐漸消失；并且造模環(huán)境的溫度也是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素，本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)在高溫時(shí)會(huì)加重視網(wǎng)膜損傷。
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