前言
青光眼(glaucoma)是一類(lèi)非常復(fù)雜的眼病，有關(guān)青光眼的發(fā)生機(jī)制、發(fā)展過(guò)程以及有效治療手段等諸多方面的問(wèn)題仍在探討之中，因此，對(duì)青光眼的病理、生理、解剖、遺傳、藥理等的研究需要廣泛地進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
青光眼是一組以視神經(jīng)凹陷性萎縮和視野缺損為特征的疾病。眼壓升高是目前公認(rèn)的青光眼主要危險(xiǎn)因素。臨床上是以降低眼壓作為治療青光眼的主要手段。青光眼發(fā)病機(jī)制和治療的研究進(jìn)展緩慢，其主要原因之一即為缺乏理想的動(dòng)物模型。因此，建立一種能夠模擬人類(lèi)青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和視神經(jīng)病變的動(dòng)物模型十分重要。
部分造模方法
使用動(dòng)物：小鼠
【造模機(jī)制】：
采用各種手段破壞房水回流通路，便可引發(fā)眼壓增高，進(jìn)一步引起視神經(jīng)變性以及視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡和缺失。使用的手段目前常用的有：①向前房注射微小顆粒混懸液或黏稠液引起小梁組織房水回流通路的堵塞；②電凝鞏膜表面至少三組靜脈以及角膜緣周?chē)?，致使眼壓升高；③使用激光造成小梁組織的變性，引起房水回流障礙，從而致使眼壓升高。
【造模方法】：
1.小鼠 選用6~10周小鼠。采用腹腔內(nèi)注射進(jìn)行全身麻醉后加上眼表局部麻醉小鼠，用PBS混懸聚苯乙烯微球(Φµm)，最終濃度為每毫升混懸體含7.2×106個(gè)微球，然后進(jìn)行小鼠單眼前房注射入大約2µ1微球，并于注射后第23天重復(fù)注射一次。每次注射完用裂隙燈觀察前房和虹膜是否清晰，有無(wú)角膜水腫和滲出現(xiàn)象。在第一次注射后每2天用眼壓計(jì)測(cè)量小鼠雙眼眼壓。每只小鼠每眼測(cè)量出6個(gè)讀數(shù)，取平均值作為當(dāng)天眼壓值。在第一次注射后2天內(nèi)可以導(dǎo)致眼壓升高50％以上，并一直維持約56天。除眼壓升高外，最終引起視神經(jīng)軸突和節(jié)細(xì)胞(RGC)丟失40％左右。
2.大鼠和家兔 選用6~10周齡動(dòng)物。將動(dòng)物放在安靜、避免強(qiáng)光的環(huán)境中靜養(yǎng)1周再進(jìn)行手術(shù)。手術(shù)方法：用3％戊巴比妥鈉按25-30mg/kg行腹腔注射麻醉。待麻醉顯效后，將動(dòng)物固定于手術(shù)臺(tái)上。行單側(cè)眼手術(shù)造模。術(shù)眼滴0.5％丁卡因眼液，沿角膜緣剪開(kāi)球結(jié)膜270°，分離并暴露鞏膜表面靜脈，用水下電凝器電凝鞏膜表面至少三組靜脈以及角膜緣周?chē)?，直至血管組織發(fā)白，復(fù)位球結(jié)膜。假手術(shù)對(duì)照只剪開(kāi)球結(jié)膜，未進(jìn)行鞏膜表面靜脈以及角膜緣周?chē)茈娔?。術(shù)眼涂抗菌眼膏。術(shù)畢將動(dòng)物置放于室溫下，待其自然蘇醒。術(shù)后5天每日抗菌眼液滴眼3次及抗菌眼膏涂眼1次。眼壓測(cè)定：分別測(cè)定術(shù)前和術(shù)后第1、2、3、4及8周高眼壓組和假手術(shù)對(duì)照組兩組大鼠動(dòng)物的雙眼壓。方法是：用3％戊巴比妥鈉按25~30mg/kg行腹腔注射，待麻醉顯效后，雙眼滴0.5％的丁卡因眼液，用眼壓計(jì)測(cè)量眼壓，每眼記錄3~5次讀數(shù)。眼壓計(jì)剛接觸角膜或剛離開(kāi)角膜的任何讀數(shù)因其不可靠均棄去不要。
3.獼猴模型 選用健康成年獼猴，雌雄不限，制模前先檢查動(dòng)物眼部情況，必須有開(kāi)的房角、正常的視乳頭以及正常的眼壓。肌內(nèi)注射氯胺酮(5mg/kg)麻醉，結(jié)膜囊滴0.5％丁卡因3次，用氬離子激光器（配以房角鏡），對(duì)準(zhǔn)小梁網(wǎng)中1/3部，以1.2~1.5W的能量，光斑直徑50µm，時(shí)間0.5秒，在360°范圍光凝100點(diǎn)，術(shù)后前3~5天用1％醋酸潑尼松龍（或相應(yīng)的抗炎劑），減少術(shù)后反應(yīng)。
【模型特點(diǎn)】：
1.小鼠模型效果較好，不會(huì)導(dǎo)致明顯的眼球結(jié)構(gòu)損傷和炎癥反應(yīng)，高眼壓維持的時(shí)間較長(zhǎng)，能誘發(fā)視神經(jīng)軸突變性和節(jié)細(xì)胞丟失。
2.大鼠和兔模型術(shù)后1、2、3、4及8周，高眼壓眼的眼壓與術(shù)前基壓、對(duì)側(cè)未手術(shù)眼及假手術(shù)組眼壓比較，差異明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后1周后眼壓基本穩(wěn)定，大鼠為4.1~6.8kPa(30.12~51.18mmHg)。通過(guò)電凝鞏膜表面至少3組靜脈及角膜周?chē)?，減少房水靜脈回流，眼壓升高明顯且持久。術(shù)眼炎癥反應(yīng)較輕。
3.猴子模型的特征是激光光凝后，眼壓有短暫急劇下降、房水流量減少的現(xiàn)象。其原因可能是炎性反應(yīng)、睫狀突受損所致。造模時(shí)需多次激光光凝以提高模型的成功率。
【模型評(píng)估和應(yīng)用】：
該模型病理改變部位主要在小梁網(wǎng)組織，有可能造成周邊虹膜前粘連，最終是阻塞房水外流，引起眼壓較長(zhǎng)時(shí)間增高、視神經(jīng)軸突變性和節(jié)細(xì)胞凋亡缺失，比較符合開(kāi)角型青光眼的病理改變。
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